طراحی روش بررسی اتصال سلولی پروتئین ها بر پایه الایزا قابل استفاده در ژن درمانی برون ت
نویسندگان
چکیده
زمینه و هدف: یکی از راهکارهای بهبود ژن درمانی، هدفمند کردن ژن، درمانگر میباشد. افزودن توالیهای کد کننده پپتیدها و یا پروتئینهای با گرایش بالا به سلولهای هدف ژن درمانگر کد کننده پروتئین ترشحی، از جمله این روشها محسوب میشود. با این وجود ارزیابی کارآمدی چنین تغییراتی در هدفمندسازی محصول ژن با روشهای معمول بررسی اتصال سلولی پروتئینهای درمانگر تولید شده در سیستم پروکاریوتی، به طور مستقیم امکان پذیر نیست. هدف از این مطالعه طراحی روشی بر مبنای آزمون الیزا برای بررسی اتصال سلولی پروتئینهای حاصل از ژن درمانی بود. مواد و روشها: به منظور هدفمندسازی ژن درمان گر mda-7، با روش مهندسی ژنتیک، توالی کد کننده پپتید rgd4c، که گرایش زیادی به اینتگرینهای سطحی سلولهای سرطانی دارد، را درست بعد از توالی پپتید نشانه مصنوعی و در ناحیه کد کننده انتهای آمین پروتئین تعبیه کردیم. سپس این cdna تغییر یافته و cdna بدون تغییر در ناقل بیانی یوکاریوتی pcdna3.1 همسانسازی شد. ناقلها در رده سلولی hek-293 ترانسفکت شدند. سپس میزان بیان mda-7 ترشح شده در محیط کشت سلولها با آزمون الیزا سنجیده شد. پس از همسان کردن غلظت پروتئینmda-7 و rgd.mda-7 در محیطهای کشت سلولهای ترانسفکت شده، از آنها به عنوان منبع این پروتئینها استفاده شد. کاهش غلظت محصول این ژنها دو ساعت پس از مجاورت با ردههای سلولی داری اینتگرین hepg2، m21 و فاقد اینتگرین saos-2 با روش الیزا بررسی و مقایسه شد. این آزمایش سه مرتبه به طور مستقل انجام گرفت. داده ها با استفاده از آزمون آماری تی تست تجزیه و تحلیل شد. یافته ها: بررسی آماری نتایج، حاکی از این بود که محصول ژن rgd.mda-7 نسبت به محصول ژن mda-7 جهت اتصال به سلول های دارای اینتگرین hepg2 و m21 به طور معنیداری گرایش بیشتری دارد، در حالی که جهت اتصال به رده سلولی فاقد اینتگرین saos-2 تفاوت معنی داری نداشتند. بحث: به نظر میرسد روش طراحی شده در این تحقیق، راهکار مناسبی جهت ارزیابی اتصال سلولی پروتئینها در کاربردهای ژن درمانی باشد.
منابع مشابه
طراحی روش بررسی اتصال سلولی پروتئینها بر پایه الایزا قابل استفاده در ژن‌درمانی برون ت
زمینه و هدف: یکی از راهکارهای بهبود ژن درمانی، هدفمند کردن ژن، درمانگر میباشد. افزودن توالیهای کد کننده پپتیدها و یا پروتئینهای با گرایش بالا به سلولهای هدف ژن درمانگر کد کننده پروتئین ترشحی، از جمله این روشها محسوب میشود. با این وجود ارزیابی کارآمدی چنین تغییراتی در هدفمندسازی محصول ژن با روشهای معمول بررسی اتصال سلولی پروتئینهای درمانگر تولید شده در سیستم پروکاریوتی، به طور مستقیم ام...
متن کاملطراحی روش الایزا جهت سنجش آنتی‌بادی ضد استرپتولیزین- O بر پایه پروتئین نوترکیب استرپتولیزین- O
سابقه و هدف: باکتری استرپتوکوک بتا همولیتیک گروه A اصلی‌ترین عامل عفونت‌های گوش و حلق و بینی میباشد. عدم درمان یا تاخیر در اقدامات درمانی، منجر به اختلالات جدی مانند تب روماتیسمی حاد و گلومرونفریت میشود. اندازه‌گیری آنتی‌بادی ضد استرپتولیزین- O به عنوان یک مارکر در تشخیص این عفونت کاربرد دارد. تهیه استرپتولیزین از محیط کشت باکتری وقت‌گیر و هم‌راه با آلودگی است. در این مطالعه جهت اندازه‌گیری...
متن کاملطراحی روش الایزا جهت سنجش آنتی بادی ضد استرپتولیزین- o بر پایه پروتئین نوترکیب استرپتولیزین- o
سابقه و هدف: باکتری استرپتوکوک بتا همولیتیک گروه a اصلی ترین عامل عفونت های گوش و حلق و بینی می باشد. عدم درمان یا تاخیر در اقدامات درمانی، منجر به اختلالات جدی مانند تب روماتیسمی حاد و گلومرونفریت می شود. اندازه گیری آنتی بادی ضد استرپتولیزین- o به عنوان یک مارکر در تشخیص این عفونت کاربرد دارد. تهیه استرپتولیزین از محیط کشت باکتری وقت گیر و هم راه با آلودگی است. در این مطالعه جهت اندازه گیری آ...
متن کاملبررسی مهار بیان ژن رپرسور گاماگلوبین با روش RNAi در رده سلولی اریتروئیدی 562 K با هدف ژن درمانی بتاتالاسمی
سابقه و هدف: بتاتالاسمی از بیماریهای ژنتیکی است که سبب کم‌خونی حاد در افراد مبتلا میشود. یکی از روشهای درمان بتاتالاسمی، القای ژن گاماگلوبین جنینی است. کمپلکس پروتئینی DRED از رپرسورهای گاماگلوبین است که از دو زیر واحد متصل شونده به DNA، به نام 2 TRو 4TR تشکیل شده است. یک روش جالب جهت افزایش بیان گاماگلوبین، مهار بیان 4TR توسط مولکول‌های siRNA میباشد. هدف از این تحقیق، راه‌اندازی سیستم RNAi ب...
متن کاملبررسی عوامل موثر بر خواص کامپوزیتهای متخلخل بر پایه کاربید سیلیسیم دارای اتصال کوردیریتی تهیه شده به روش اتصال- واکنشی
در این پژوهش، کامپوزیتهای متخلخل بر پایه کاربید سیلیسیم دارای اتصال کوردیریتی بهوسیله روش اتصال واکنشی ساخته شد. به همین دلیل از کاربید سیلیسیم، تالک و کائولن بعنوان مواد اولیه و از گرافیت و اسفنج پلی اورتان بعنوان عوامل ایجاد تخلخل برای ساخت این نوع کامپوزیتها استفاده شد. در این ارتباط تاثیر پارامترهایی همانند نوع و مقدار مواد اولیه، مقدار کاربید سیلیسیم، نوع و مقدار عامل ایجاد تخلخل بر خوا...
متن کاملبهینه سازی آنتی ژن T برای طراحی و ساخت پلاسمید اپی زومال بر مبنای آنتی ژن T ویروس سیمین 40 موتانت
زمینه و هدف: ژن�درمانی و تجویز پروتئین های نوترکیب از روش های معمول در درمان بیماری های ژنتیکی می باشد. اما موانع موجود در این دو روش مانند تجویز محدود پلاسمید حاوی ژن مورد نظر یا وارد شدن تصادفی ژن انتقالی در ژنوم در مورد ژن درمانی و میزان بیان کم پروتئین در مورد تولید پروتئین های نوترکیب محققین را بر آن داشته است پلاسمید اپی زومالی طراحی کنند که بوسیله پروتئین های ویروسی در تعداد نسخه بالا ...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
ارمغان دانشجلد ۲۱، شماره ۴، صفحات ۳۷۲-۳۸۱
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023